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易倍体育的电转感受态制备方法和电转化方法

发布者:wubaiyi2017-09-02

    电转感受态制备方法和电转化方法
  (1)接种工业酒精酵母至30 mL液体YEPD培养基,30度培养12 h;
  (2)取培养物以1%的接种量转接到30 mL新鲜YEPD液体培养基中,30度培养8 h,
使菌体达到同步生长状态;
  (3)将酵母培养物置于冰上放置30 min后,6,000 r/min离心5 min收集菌体;
  (4)弃上清,加入已预冷的15 mL超纯水洗涤菌体一次;
  (5)6,000 r/min离心5 min收集菌体,用15 mL 1 mol/L山梨醇重复洗涤菌体三次;
  (6)离心收集菌体,加入200μL 1 mol/L山梨醇重悬浮菌体,取200μL的菌悬液至1.5 mL
离心管中;
  (7)在制得的菌悬液中加入20μL(≤5μg)待转化的质粒或DNA片段,轻轻混匀后冰浴
10 min;
  (8)将冰浴后的菌悬液转入已预冷的电转杯中,1,500 V电击5 ms;
  (9)加入适量体积的1 mol/L山梨醇将电转后的菌悬液从电转杯中洗出,取200μL涂布
相应的抗性平板;
  (10)30度培养3-5天挑选转化子。

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